RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit 의 bulk version 입니다.

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RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit는 probe를 이용한 qRT-PCR 제품으로, RNA 정제 과정 없이 동물 조직 및 다양한 임상 시료 (혈액, 혈청, 소변, swab 시료 등)로부터 시료 직접 적용 방법으로 역전사 반응과 real-time PCR 증폭 반응이 가능하도록 설계된 제품입니다. 본 제품은 고속 증폭이 가능하여 1시간 안에 qRT-PCR 반응을 마칠 수 있습니다. 제품에 포함된 enzyme mix에는 reverse transcriptase, antibody-coupled Taq DNA polymerase, RNase inhibitor, 및 heat-labile uracil-DNA-glycosylase (HL-UDG)가 혼합되어 있습니다. Reaction buffer는 반응에 최적화된 buffer components와 함께 Mg²⁺, dUTP, dNTPs 및 기타 필요한 요소들이 혼합되어 있습니다. 또한 본 제품에 적용된 UDG/dUTP system은 carryover contamination을 방지할 수 있습니다. HL-UDG는 PCR 반응물 준비 및 진행과정에서 dU를 함유하는 DNA로부터 uracil을 효과적으로 제거합니다.

Figure 1. Direct and multiplex real-time RT-PCR using the RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit.

Swab lysate spiked with the 10⁸ copies of SARS-CoV-2 RNA were prepared following the protocol. 1 μl of the lysate (corresponding to approximately 10⁶ copies) and SARS-CoV-2 viral RNA (10⁶,10⁵,10⁴, 10³, and 10² copies) were analyzed using three different sets of target-specific primers and probes (S gene, ORF8, and N gene). The probes were labeled with FAM (S gene), HEX (ORF8), and Texas Red (N gene). The multiplex reaction was tested using the RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit on a real-time PCR instrument, Bio-Rad CFX96.

Figure 2. Direct and fast real-time RT-PCR using RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit from mouse tissues.

The lysates from mouse whole blood or liver were prepared following the protocol. Each 1 μl of lysate and purified total RNA (10, 1, 0.1, and 0.01ng) were analyzed using a mouse GAPDH gene-specific primers and probe labeled with FAM on a real-time PCR instrument, Bio-Rad CFX96.

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